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Ítem A Comparative Analysis of Mitogenomes in Species of the Tapinoma nigerrimum Complex and Other Species of the Genus Tapinoma (Formicidae, Dolichoderinae)(MDPI, 2024-12-02) Ruiz-Mena, Areli; Mora, Pablo; Rico-Porras, José M.; Kaufmann, Bernard; Seifert, Bernhard; Palomeque, Teresa; Lorite, PedroUsing next-generation sequencing data, the complete mitogenomes of six species from the genus Tapinoma were assembled. This study explores the mitochondrial genomes of Tapinoma species, among them the five species from the Tapinoma nigerrimum complex, comparing them with each other and with other species from Dolichoderinae subfamily to understand their evolutionary relationships and evolution. Tapinoma mitochondrial genomes contain the typical set of 13 protein-coding genes, two ribosomal RNA genes, 22 transfer RNAs, and the A + T-rich control region. A phylogenetic analysis using the protein-coding gene sequences from available Dolichoderinae mitogenomes supports the monophyletic nature of the genus Tapinoma, with the T. nigerrimum complex forming a well-supported clade. Key findings include genetic traits unique to the T. nigerrimum complex, such as a start codon in the atp8 gene and a complete stop codon in cox1, distinguishing them from other Tapinoma species. Additionally, a gene rearrangement involving tRNA-Trp, tRNA-Cys, and tRNA-Tyr was found exclusively in the Tapinoma species, suggesting a potential phylogenetic marker for the genus.Ítem The first insight into Acanthocephalus (Palaeacanthocephala) satellitome: species-specific satellites as potential cytogenetic markers(Springer Nature, 2025-01-23) Marková, Anna; Orosová, Martina; Mora, Pablo; Benovics, Michal; Lorite, PedroAcanthocephalan parasites are often overlooked in many areas of research, and satellitome and cytogenetic analyzes are no exception. The species of the genus Acanthocephalus are known for their very small chromosomes with ambiguous morphology, which makes karyotyping difficult. In this study, we performed the first satellitome analysis of three Acanthocephalus species to identify species- and chromosome-specific satellites that could serve as cytogenetic markers. RepeatExplorer2 revealed a remarkably high number of species-specific repeats, with a predominance of satellite DNAs, alongside variations in repetitive content between sexes. Five satellites in A. anguillae, two in A. lucii and six in A. ranae were successfully mapped to chromosomes using FISH. Each satellite showed a clustered hybridization signal at specific chromosomal locations, which allowed us to create a schematic representation of the distribution of satellites for each species. These newly identified satellites proved to be useful chromosomal markers for the accurate identification of homologous chromosome pairs. No FISH-positive signals were observed on the supernumerary chromosomes of A. anguillae and A. lucii, supporting the hypothesis that these chromosomes have recent origin.Ítem Differential chamber-specific expression and regulation of long non-coding RNAs during cardiac development(Elsevier, 2019-10) García-Padilla, Carlos; Domínguez, Jorge Nicolás; Aránega, Amelia Eva; Franco, DiegoÍtem Live Imaging of Early Cardiac Progenitors in the Mouse Embryo(JOURNAL OF VISUALIZED EXPERIMENTS, 2022-07-12) Sendra, Miquel; Mañes, Jorge; Domínguez, Jorge N; Torres, MiguelLos primeros pasos del desarrollo del corazón implican cambios drásticos en el comportamiento y la diferenciación celular. Mientras que el análisis de embriones fijados permite estudiar en detalle etapas específicas del desarrollo en una imagen estática, la microscopía en vivo captura eventos morfogenéticos dinámicos, como la migración celular, los cambios de forma y la diferenciación, observando al embrión mientras se desarrolla. Esto complementa el análisis de embriones fijados y amplía la comprensión de cómo los órganos se forman durante la embriogénesis. A pesar de sus ventajas, la microscopía en vivo rara vez se utiliza en modelos de ratón debido al desafío técnico que supone. Los embriones de ratón en etapas tempranas son muy sensibles cuando se cultivan ex vivo y requieren un manejo experimentado. Para facilitar un uso más amplio de la microscopía en vivo en la investigación del desarrollo en ratones, este artículo presenta un protocolo detallado para llevar a cabo el cultivo de embriones de ratón ex vivo y videoanálisis mediante microscopía de dos fotones. Además del protocolo, se proporcionan consejos sobre el manejo de embriones y la optimización del cultivo. Esto ayudará a comprender eventos clave en la organogénesis temprana en ratones, mejorando la comprensión de la biología de los progenitores cardiovasculares.Ítem Cre recombinase microinjection for single-cell tracing and localised gene targeting(COMPANY BIOLOGISTS LTD, 2023-02-15) Sendra, Miquel; Hourcade, Juan de Dios; Temiño, Susana; Sarabia, Antonio José; Ocaña, Oscar H; Domínguez, Jorge N; Torres, MiguelLas técnicas de análisis de linajes celulares son esenciales para comprender el desarrollo embrionario. Las microinyecciones de colorantes lipofílicos, la transfección viral y la iontoforesis han sido técnicas clave para mapear el origen de las células progenitoras que forman los diferentes órganos en el embrión de ratón post-implantación. Estas técnicas requieren habilidades avanzadas de manipulación, y solo la técnica de iontoforesis, técnica compleja y de eficiencia limitada, ha sido utilizada para el marcaje de células individuales. En este estudio, hemos optimizado una nueva herramienta para llevar a cabo el trazado de linajes celulares y ablación génica localizada, utilizando microinyección de recombinasa Cre permeable a células (TAT-Cre). En primer lugar, hemos “mapeado” el destino de las células progenitoras indiferenciadas hacia las diferentes cámaras del corazón embrionario. Por otro lado, hemos logrado optimizar las condiciones para, ajustando la dosis de TAT-Cre, lo que permite realizar análisis clonales de los progenitores de mesodermo naciente. Finalmente, la microinyección de TAT-Cre en embriones Mycnflox/flox en el tubo cardíaco primitivo reveló que el gen Mycn desempeña un papel autónomo en la proliferación de cardiomiocitos. Esta herramienta ayudará a los investigadores a identificar las células progenitoras y rutas moleculares involucradas en el desarrollo de órganos, contribuyendo a entender el origen de los defectos congénitos.Ítem MiR-195 enhances cardiomyogenic differentiation of the proepicardium/septum transversum by Smurf1 and Foxp1 modulation(Nature Portafolio, 2020-06-09) Dueñas, Ángel; Expósito, Almudena; Muñoz, María del Mar; de Manuel, María José; Cámara-Morales, Andrea; Serrano-Osorio, Fabio; García-Padilla, Carlos; Hernández-Torres, Francisco; Domínguez, Jorge N; Aránega, Amelia E; Franco, DiegoEl desarrollo cardiovascular es un proceso complejo en el que participan múltiples linajes celulares, entre ellos los campos cardíacos primario y secundario. Además de la contribución de estos campos cardiogénicos, el corazón en desarrollo recibe la contribución de otros componentes celulares de origen extracardíaco, proporcionados por las células de la cresta neural cardíaca y las células derivadas del proepicardio. El proepicardio (PE) es una estructura transitoria con forma de coliflor ubicada entre los primordios cardíaco y hepático. El PE está constituido por un componente interno mesenquimal rodeado por un revestimiento epitelial externo. Durante el desarrollo, las células derivadas del PE migran hacia el corazón embrionario vecino y progresivamente cubren su superficie externa, lo que da lugar a la formación del epicardio embrionario. Estudios llevados a cabo en pollo han demostrado claramente que las células derivadas del epicardio pueden contribuir a la formación de fibroblastos, células endoteliales y células musculares lisas. Sorprendentemente, el aislamiento del primordio en desarrollo del PE y su cultivo ex vivo conduce espontáneamente a la diferenciación en cardiomiocitos contráctiles, un proceso que es mejorado por la administración de Bmp, pero detenido por la administración de Fgf. En este estudio, proporcionamos una caracterización exhaustiva del perfil de expresión de múltiples microARN (microRNAs) durante el desarrollo del epicardio en pollo. Posteriormente, identificamos que miR-125, miR-146, miR-195 y miR-223 potencian selectivamente la cardiomiogénesis tanto en explantes de PE/ST como en el epicardio embrionario, un proceso mediado por Smurf1 y Foxp1. Además, identificamos tres nuevos ARN largos no codificantes con expresión aumentada en el PE/ST, que están regulados de manera complementaria por la administración de Bmp y Fgf, así como por los microARN que promueven selectivamente la cardiomiogénesis. Esto respalda un papel crucial de estos ARN largos no codificantes en la cardiomiogénesis mediada por microARN en las células del PE/ST.Ítem Dissecting the complexity of early heart progenitor cells(MDPI, 2021-12-26) Sendra, M; Domínguez, JN; Torres, M; Ocaña, OHEl desarrollo temprano del corazón depende de la participación coordinada de fuentes celulares heterogéneas. Como demostró el trabajo pionero de Adriana C. Gittenberger-de Groot, caracterizar estas distintas fuentes celulares nos ayuda a comprender los defectos congénitos del corazón. A pesar de décadas de investigación sobre la segregación de linajes que forman el tubo cardíaco primitivo, estamos lejos de entender su complejidad en su totalidad. Actualmente, los enfoques de single cell o célula “única” en español, están proporcionando un nivel de detalle sin precedentes sobre la heterogeneidad celular, ofreciendo nuevas oportunidades para descifrar su papel funcional. En esta revisión, nos centraremos en tres aspectos clave de la morfogénesis temprana del corazón: primero, la segregación de los linajes miocárdicos y endocárdicos, que da lugar a una diversificación temprana de linajes en el desarrollo cardíaco; segundo, las señales que dirigen la diferenciación en estas células progenitoras; y tercero, la heterogeneidad transcripcional de los progenitores de cardiomiocitos del tubo cardíaco primitivo. Finalmente, discutimos cómo la transcriptómica y la epigenómica de célula “única”, junto con técnicas de imágenes en vivo y análisis funcionales, probablemente transformarán la forma en que profundizamos en la complejidad del desarrollo cardíaco y sus vínculos con los defectos congénitos.Ítem Regulation of Epicardial Cell Fate during Cardiac Development and Disease: An Overview(MDPI, 2022-03-06) Sanchez-Fernandez, Cristina; Rodriguez-Outeiriño, Lara; Matias-Valiente, Lidia; Ramirez de Acuña, Felicitas; Hernandez-Torres, Francisco; Lozano-Velasco, Estefania; Dominguez, Jorge Nicolás; Franco, Diego; Aránega, Amelia EvaEl epicardio es la capa celular más externa del corazón de los vertebrados, que se origina durante el desarrollo a partir de precursores mesoteliales ubicados en el proepicardio y el septum transversum. La capa epicárdica desempeña un papel clave durante la cardiogénesis, ya que un subconjunto de células derivadas del epicardio (EPDCs, por sus siglas en inglés) sufre una transición epitelio-mesénquima (EMT); migran hacia el miocardio; y se diferencian en distintos tipos celulares, como las células musculares lisas vasculares coronarias, los fibroblastos cardíacos, las células endoteliales y, presumiblemente, una subpoblación de cardiomiocitos, contribuyendo así a la formación completa del corazón. Además, el epicardio es una fuente de factores paracrinos que contribuyen al crecimiento cardíaco en las últimas etapas de la cardiogénesis. Aunque varios estudios de trazado de linajes han proporcionado alguna evidencia sobre la determinación del destino celular epicárdico, los mecanismos moleculares subyacentes a la heterogeneidad de las células epicárdicas aún no se comprenden completamente. Trabajos llevados a cabo durante la última década han señalado que el epicardio adulto se reactiva después de un daño cardíaco, reexpresando algunos genes embrionarios y contribuyendo a la remodelación del corazón. Por lo tanto, se ha propuesto al epicardio como una posible fuente de células cardiacas que ayuden en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares que requieran regeneración. En esta revisión, hacemos un resumen sobre los mecanismos celulares y moleculares que regulan las células epicárdicas durante el desarrollo embrionario, así como su control de la reactivación en la reparación cardíaca tras un daño.Ítem Identification of atrial-enriched lncRNA Walras linked to cardiomyocyte cytoarchitecture and atrial fibrillation(Wiley, 2021-12-03) García-Padilla, Carlos; Domínguez, Jorge N.; Lodde, Valeria; Munk, Rachel; Abdelmohsen, Kotb; Gorospe, Myriam; Jiménez-Sábado, Verónica; Ginel, Antonio; Hove-Madsen, Leif; Aránega, Amelia E.; Franco, DiegoLa fibrilación auricular (FA) es la arritmia cardíaca más prevalente en humanos. Los análisis genéticos y genómicos han demostrado recientemente que el factor de transcripción homeobox Pitx2 desempeña un papel fundamental al regular la expresión de diversos factores de crecimiento, microARN (miRNAs) y canales iónicos, lo que conduce a alteraciones morfológicas y moleculares que favorecen la aparición de la FA. En este estudio abordamos la posible contribución de los ARN largos no codificantes (lncRNAs) dentro de la vía de señalización Pitx2>Wnt>miRNA. Los análisis in silico de los lncRNAs localizados en las proximidades de los loci cromosómicos Pitx2, Wnt8 y Wnt11 identificaron cinco nuevos lncRNAs con expresión diferencial durante el desarrollo cardíaco. Es importante destacar que tres de ellos, Walaa, Walras y Wallrd, están evolutivamente conservados en humanos y mostraron una expresión preferencial en las aurículas durante la embriogénesis. Además, Walrad mostró una expresión moderada durante la embriogénesis, pero fue más abundante en la aurícula derecha. Walaa, Walras y Wallrd fueron regulados de manera distinta por Pitx2, Wnt8 y Wnt11, mientras que Wallrd se encontró severamente elevado en ratones deficientes de Pitx2 en las aurículas. Además, la administración de sustratos proarrítmicos y prohipertróficos en cultivos primarios de cardiomiocitos moduló consistentemente la expresión de estos lncRNAs, lo que respalda papeles moduladores específicos de los factores de riesgo cardiovascular asociados a la FA en la regulación de estos lncRNAs. Los ensayos de afinidad de Walras mostraron su asociación con distintas proteínas citoplasmáticas y nucleares previamente implicadas en la fisiopatología cardíaca, mientras que los ensayos de pérdida de función respaldaron un papel clave de este lncRNA en la organización del citoesqueleto. Proponemos que los lncRNAs Walaa, Walras y Wallrd, regulados de manera específica por la señalización Pitx2>Wnt>miRNA y por factores proarrítmicos y prohipertróficos, están implicados en la arritmogénesis auricular, y que Walras, además, juega un papel en la citoarquitectura de los cardiomiocitos.Ítem miR-106b is a novel target to promote muscle regeneration and restore satellite stem cell function in injured Duchenne dystrophic muscle(Cell Press, 2022-08-20) Rodriguez-Outeriño, Lara; Hernandez-Torres, Francisco; Ramirez de Acuña, Felicitas; Rastrojo, Alberto; Creus, Carlota; Carvajal, Alejandra; Salmeron, Luis; Montolio, Marisol; Soblechero-Martin, Patricia; Arechavala-Gomeza, Virginia; Franco, Diego; Aranega, Amelia EvaLas células satélite (SC), células madre musculares , muestran heterogeneidad funcional y cambios dramáticos vinculados a sus capacidades regenerativas están asociados con enfermedades que desgastan los músculos. El comportamiento de las SC está relacionado con la expresión endógena del factor de transcripción miogénico MYF5 y la propensión a entrar en el ciclo celular. Aquí, informamos un papel para miR-106b que refuerza la inhibición de MYF5 y bloquea la proliferación celular en un subconjunto de la población de SC altamente inactiva. La regulación negativa de miR-106b ocurre durante la activación de las SC y es necesaria para la reparación muscular adecuada. Además, miR-106b aumenta en ratones distróficos y la inyección intramuscular de antimiR en ratones mdx lesionados mejora la regeneración muscular promoviendo cambios transcripcionales involucrados en la diferenciación del músculo esquelético . La inhibición de miR-106b promueve el injerto de células madre musculares humanas. Además, el miR-106b también se encuentra en niveles elevados en células madre musculares distróficas humanas y su inhibición mejora los defectos proliferativos intrínsecos y aumenta su potencial miogénico. Este estudio demuestra que el miR-106b es un modulador importante de la quiescencia de las células madre musculares y que el miR-106b puede ser un nuevo objetivo para desarrollar estrategias terapéuticas destinadas a promover la regeneración muscular mejorando las capacidades regenerativas del músculo distrófico lesionado.Ítem Differential molecular response of monodehydroascorbate reductase and glutathione reductase by nitration and S-nitrosylation(Oxford Academic, 2015-06-25) Begara-Morales, Juan C.; Sánchez-Calvo, Beatriz; Chaki, Mounira; Mata-Pérez, Capilla; Valderrama, Raquel; Padilla, María N.; Jaramillo, Javier; Luque, Francisco; Corpas, Francisco J.; Barroso, Juan B.The ascorbate–glutathione cycle is a metabolic pathway that detoxifies hydrogen peroxide and involves enzymatic and non-enzymatic antioxidants. Proteomic studies have shown that some enzymes in this cycle such as ascorbate peroxidase (APX), monodehydroascorbate reductase (MDAR), and glutathione reductase (GR) are potential targets for post-translational modifications (PMTs) mediated by nitric oxide-derived molecules. Using purified recombinant pea peroxisomal MDAR and cytosolic and chloroplastic GR enzymes produced in Escherichia coli, the effects of peroxynitrite (ONOO–) and S-nitrosoglutathione (GSNO) which are known to mediate protein nitration and S-nitrosylation processes, respectively, were analysed. Although ONOO– and GSNO inhibit peroxisomal MDAR activity, chloroplastic and cytosolic GR were not affected by these molecules. Mass spectrometric analysis of the nitrated MDAR revealed that Tyr213, Try292, and Tyr345 were exclusively nitrated to 3-nitrotyrosine by ONOO–. The location of these residues in the structure of pea peroxisomal MDAR reveals that Tyr345 is found at 3.3 Å of His313 which is involved in the NADP-binding site. Site-directed mutagenesis confirmed Tyr345 as the primary site of nitration responsible for the inhibition of MDAR activity by ONOO–. These results provide new insights into the molecular regulation of MDAR which is deactivated by nitration and S-nitrosylation. However, GR was not affected by ONOO– or GSNO, suggesting the existence of a mechanism to conserve redox status by maintaining the level of reduced GSH. Under a nitro-oxidative stress induced by salinity (150mM NaCl), MDAR expression (mRNA, protein, and enzyme activity levels) was increased, probably to compensate the inhibitory effects of S-nitrosylation and nitration on the enzyme. The present data show the modulation of the antioxidative response of key enzymes in the ascorbate–glutathione cycle by nitric oxide (NO)-PTMs, thus indicating the close involvement of NO and reactive oxygen species metabolism in antioxidant defence against nitro-oxidative stress situations in plants.Ítem Differential transcriptomic analysis by RNA-Seq of GSNO-responsive genes between Arabidopsis roots and leaves(Oxford Academic, 2014-06) Begara-Morales, Juan C.; Sánchez-Calvo, Beatriz; Luque, Francisco; Leyva-Pérez, María O.; Leterrier, Marina; Corpas, Francisco J.; Barroso, Juan B.S-Nitrosoglutathione (GSNO) is a nitric oxide-derived molecule that can regulate protein function by a post-translational modification designated S-nitrosylation. GSNO has also been detected in different plant organs under physiological and stress conditions, and it can also modulate gene expression. Thirty-day-old Arabidopsis plants were grown under hydroponic conditions, and exogenous 1 mM GSNO was applied to the root systems for 3 h. Differential gene expression analyses were carried out both in roots and in leaves by RNA sequencing (RNA-seq). A total of 3,263 genes were identified as being modulated by GSNO. Most of the genes identified were associated with the mechanism of protection against stress situations, many of these having previously been identified as target genes of GSNO by array-based methods. However, new genes were identified, such as that for methionine sulfoxide reductase (MSR) in leaves or different miscellaneous RNA (miscRNA) genes in Arabidopsis roots. As a result, 1,945 GSNO-responsive genes expressed differently in leaves and roots were identified, and 114 of these corresponded exclusively to one of these organs. In summary, it is demonstrated that RNA-seq extends our knowledge of GSNO as a signaling molecule which differentially modulates gene expression in roots and leaves under non-stress conditions.Ítem Transcriptomic profiling of linolenic acid-responsive genes in ROS signaling from RNA-seq data in Arabidopsis(Frontiers Media SA, 2015-03-17) Mata-Pérez, Capilla; Sánchez-Calvo, Beatriz; Begara-Morales, Juan C.; Luque, Francisco; Jiménez-Ruiz, Jaime; Padilla, María N.; Fierro-Risco, Jesús; Valderrama, Raquel; Fernández-Ocaña, Ana; Corpas, Francisco J.; Barroso, Juan B.Linolenic acid (Ln) released from chloroplast membrane galactolipids is a precursor of the phytohormone jasmonic acid (JA). The involvement of this hormone in different plant biological processes, such as responses to biotic stress conditions, has been extensively studied. However, the role of Ln in the regulation of gene expression during abiotic stress situations mediated by cellular redox changes and/or by oxidative stress processes remains poorly understood. An RNA-seq approach has increased our knowledge of the interplay among Ln, oxidative stress and ROS signaling that mediates abiotic stress conditions. Transcriptome analysis with the aid of RNA-seq in the absence of oxidative stress revealed that the incubation of Arabidopsis thaliana cell suspension cultures (ACSC) with Ln resulted in the modulation of 7525 genes, of which 3034 genes had a 2-fold-change, being 533 up- and 2501 down-regulated genes, respectively. Thus, RNA-seq data analysis showed that an important set of these genes were associated with the jasmonic acid biosynthetic pathway including lypoxygenases (LOXs) and Allene oxide cyclases (AOCs). In addition, several transcription factor families involved in the response to biotic stress conditions (pathogen attacks or herbivore feeding), such as WRKY, JAZ, MYC, and LRR were also modified in response to Ln. However, this study also shows that Ln has the capacity to modulate the expression of genes involved in the response to abiotic stress conditions, particularly those mediated by ROS signaling. In this regard, we were able to identify new targets such as galactinol synthase 1 (GOLS1), methionine sulfoxide reductase (MSR) and alkenal reductase in ACSC. It is therefore possible to suggest that, in the absence of any oxidative stress, Ln is capable of modulating new sets of genes involved in the signaling mechanism mediated by additional abiotic stresses (salinity, UV and high light intensity) and especially in stresses mediated by ROS.Ítem MiR-195 enhances cardiomyogenic differentiation of the proepicardium/septum transversum by Smurf1 and Foxp1 modulation(Nature portfolio, 2020-06-09) Dueñas, Angel; Exposito, Almudena; Muñoz, Maria del Mar; De Manuel, Maria Jose; Camara-Morales, Andrea; Serrano-Osorio, Fabio; Garcia-Padilla, Carlos; Hernandez-Torres, Francisco; Dominguez, Jorge N; Aranega, Amelia; Franco, DiegoEl desarrollo cardiovascular es un proceso complejo en el que intervienen múltiples linajes celulares, en concreto, el despliegue de los campos cardíacos primero y segundo. Además de la contribución de estos campos cardiogénicos, las células de la cresta neural cardíaca migratoria y las células derivadas del proepicárdico proporcionan información extracardíaca al corazón en desarrollo. El proepicardio (PE) es una estructura transitoria similar a una coliflor ubicada entre los primordios cardíaco y hepático. El PE está constituido por un componente mesenquimal interno rodeado por un revestimiento epitelial externo. Con el desarrollo, las células derivadas del proepicardio migran al corazón embrionario vecino y cubren progresivamente la superficie más externa, lo que lleva a la formación del epicardio embrionario. La evidencia experimental en pollos ha demostrado claramente que las células derivadas del epicárdico pueden contribuir claramente a los fibroblastos, las células endoteliales y las células musculares lisas. Sorprendentemente, el aislamiento del esbozo de PE en desarrollo y el cultivo ex vivo conducen espontáneamente a la diferenciación en cardiomiocitos latentes, un proceso que se mejora con Bmp pero se detiene con la administración de Fgf. En este estudio proporcionamos una caracterización integral del perfil de expresión del desarrollo de múltiples microARN durante el desarrollo epicárdico en pollos. Posteriormente, identificamos que miR-125, miR-146, miR-195 y miR-223 mejoran selectivamente la cardiomiogénesis tanto en los explantos de PE/ST como en el epicardio embrionario, un proceso impulsado por Smurf1 y Foxp1. Además, identificamos tres nuevos ARN largos no codificantes con expresión mejorada en el PE/ST, que están regulados de manera complementaria por la administración de Bmp y Fgf y por microARN que promueven selectivamente la cardiomiogénesis, lo que respalda un papel fundamental de estos ARN largos no codificantes en la cardiomiogénesis mediada por microARN de las células PE/ST.Ítem Epigenetic regulation of verticillium dahliae virulence: Does dna methylationlevel play a role?(2020) Luque, Francisco