Cre recombinase microinjection for single-cell tracing and localised gene targeting

Abstract

Las técnicas de análisis de linajes celulares son esenciales para comprender el desarrollo embrionario. Las microinyecciones de colorantes lipofílicos, la transfección viral y la iontoforesis han sido técnicas clave para mapear el origen de las células progenitoras que forman los diferentes órganos en el embrión de ratón post-implantación. Estas técnicas requieren habilidades avanzadas de manipulación, y solo la técnica de iontoforesis, técnica compleja y de eficiencia limitada, ha sido utilizada para el marcaje de células individuales. En este estudio, hemos optimizado una nueva herramienta para llevar a cabo el trazado de linajes celulares y ablación génica localizada, utilizando microinyección de recombinasa Cre permeable a células (TAT-Cre). En primer lugar, hemos “mapeado” el destino de las células progenitoras indiferenciadas hacia las diferentes cámaras del corazón embrionario. Por otro lado, hemos logrado optimizar las condiciones para, ajustando la dosis de TAT-Cre, lo que permite realizar análisis clonales de los progenitores de mesodermo naciente. Finalmente, la microinyección de TAT-Cre en embriones Mycnflox/flox en el tubo cardíaco primitivo reveló que el gen Mycn desempeña un papel autónomo en la proliferación de cardiomiocitos. Esta herramienta ayudará a los investigadores a identificar las células progenitoras y rutas moleculares involucradas en el desarrollo de órganos, contribuyendo a entender el origen de los defectos congénitos.