Examinando por Autor "Sendra, Miquel"
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Ítem Cre recombinase microinjection for single-cell tracing and localised gene targeting(COMPANY BIOLOGISTS LTD, 2023-02-15) Sendra, Miquel; Hourcade, Juan de Dios; Temiño, Susana; Sarabia, Antonio José; Ocaña, Oscar H; Domínguez, Jorge N; Torres, MiguelLas técnicas de análisis de linajes celulares son esenciales para comprender el desarrollo embrionario. Las microinyecciones de colorantes lipofílicos, la transfección viral y la iontoforesis han sido técnicas clave para mapear el origen de las células progenitoras que forman los diferentes órganos en el embrión de ratón post-implantación. Estas técnicas requieren habilidades avanzadas de manipulación, y solo la técnica de iontoforesis, técnica compleja y de eficiencia limitada, ha sido utilizada para el marcaje de células individuales. En este estudio, hemos optimizado una nueva herramienta para llevar a cabo el trazado de linajes celulares y ablación génica localizada, utilizando microinyección de recombinasa Cre permeable a células (TAT-Cre). En primer lugar, hemos “mapeado” el destino de las células progenitoras indiferenciadas hacia las diferentes cámaras del corazón embrionario. Por otro lado, hemos logrado optimizar las condiciones para, ajustando la dosis de TAT-Cre, lo que permite realizar análisis clonales de los progenitores de mesodermo naciente. Finalmente, la microinyección de TAT-Cre en embriones Mycnflox/flox en el tubo cardíaco primitivo reveló que el gen Mycn desempeña un papel autónomo en la proliferación de cardiomiocitos. Esta herramienta ayudará a los investigadores a identificar las células progenitoras y rutas moleculares involucradas en el desarrollo de órganos, contribuyendo a entender el origen de los defectos congénitos.Ítem Dissecting the complexity of early heart progenitor cells(MDPI, 2021-12-21) Sendra, Miquel; Domínguez, Jorge Nicolás; Torres, Miguel; Ocaña, Oscar HoracioEl desarrollo temprano del corazón depende de la participación coordinada de fuentes celulares heterogéneas. Como demostró el trabajo pionero de Adriana C. Gittenberger-de Groot, caracterizar estas distintas fuentes celulares nos ayuda a comprender los defectos congénitos del corazón. A pesar de décadas de investigación sobre la segregación de linajes que forman el tubo cardíaco primitivo, estamos lejos de entender su complejidad en su totalidad. Actualmente, los enfoques de célula única están proporcionando un nivel de detalle sin precedentes sobre la heterogeneidad celular, ofreciendo nuevas oportunidades para descifrar su papel funcional. En esta revisión, nos centraremos en tres aspectos clave de la morfogénesis temprana del corazón: primero, la segregación de los linajes miocárdicos y endocárdicos, que da lugar a una diversificación temprana de linajes en el desarrollo cardíaco; segundo, las señales que dirigen la diferenciación en estas células progenitoras; y tercero, la heterogeneidad transcripcional de los progenitores de cardiomiocitos del tubo cardíaco primitivo. Finalmente, discutimos cómo la transcriptómica y la epigenómica de célula única, junto con técnicas de imágenes en vivo y análisis funcionales, probablemente transformarán la forma en que profundizamos en la complejidad del desarrollo cardíaco y sus vínculos con los defectos congénitos.Ítem Live Imaging of Early Cardiac Progenitors in the Mouse Embryo(JOURNAL OF VISUALIZED EXPERIMENTS, 2022-07-12) Sendra, Miquel; Mañes, Jorge; Domínguez, Jorge N; Torres, MiguelLos primeros pasos del desarrollo del corazón implican cambios drásticos en el comportamiento y la diferenciación celular. Mientras que el análisis de embriones fijados permite estudiar en detalle etapas específicas del desarrollo en una imagen estática, la microscopía en vivo captura eventos morfogenéticos dinámicos, como la migración celular, los cambios de forma y la diferenciación, observando al embrión mientras se desarrolla. Esto complementa el análisis de embriones fijados y amplía la comprensión de cómo los órganos se forman durante la embriogénesis. A pesar de sus ventajas, la microscopía en vivo rara vez se utiliza en modelos de ratón debido al desafío técnico que supone. Los embriones de ratón en etapas tempranas son muy sensibles cuando se cultivan ex vivo y requieren un manejo experimentado. Para facilitar un uso más amplio de la microscopía en vivo en la investigación del desarrollo en ratones, este artículo presenta un protocolo detallado para llevar a cabo el cultivo de embriones de ratón ex vivo y videoanálisis mediante microscopía de dos fotones. Además del protocolo, se proporcionan consejos sobre el manejo de embriones y la optimización del cultivo. Esto ayudará a comprender eventos clave en la organogénesis temprana en ratones, mejorando la comprensión de la biología de los progenitores cardiovasculares.